鱟系海產(chǎn)動(dòng)物,生物學(xué)分類上屬節(jié)肢動(dòng)物門(mén)肢口綱劍尾目。在其血液中含有一種特殊的變形細(xì)胞(amoebocyte)。這種變形細(xì)胞中含有能被內(nèi)毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白,因此,內(nèi)毒素檢測(cè)LT法(鱟變形細(xì)胞溶解物試驗(yàn))的機(jī)理即是內(nèi)毒素通過(guò)激活C因子、B因子、前凝固酶,而使可凝固蛋白變成凝固蛋白(肉眼可見(jiàn)的凝膠),從而可以半定量及定量地測(cè)知內(nèi)毒素的含量(圖1)。
日本學(xué)者在對(duì)可凝固蛋白氨基酸順序研究的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素激活的凝固酶的作用點(diǎn)為可凝固蛋白的第18(Arg)和19(Ghr)間的肽健,以及第46(Arg)和47 (G1y)間的肽鍵,而裂解為A鏈、B鏈及C肽。且在切斷部位的羧基端氨基酸的結(jié)構(gòu)均為-G1y-Arg,提出此酶的作用有特異性(圖2)。產(chǎn)色基質(zhì)內(nèi)毒素檢測(cè)法即是據(jù)此原理而設(shè)計(jì)的。
一般地講,內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)是非常特異的,因此,LT法的假陽(yáng)性極少。從革法蘭氏陽(yáng)性菌分離出的肽聚糖雖亦能凝固鱟試劑,但其活性比內(nèi)毒素低1000~ 400000倍。
近來(lái)發(fā)現(xiàn)一種新的合成抗癌劑羧甲基(1→3)-β-D-葡聚糖亦能與鱟試劑起反應(yīng)。其反應(yīng)原理是:鱟試劑中含有一種稱為G因子的物質(zhì),此抗癌劑能激活鱟試劑中的G因子,而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白,從而形成凝膠(圖2)。至此凝血酶、凝血激酶,Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等,亦可凝固鱟試劑而引起假陽(yáng)性反應(yīng)。但用氯仿處理此等物質(zhì)(浸取3~4小時(shí))可以除去這些物質(zhì),從而可避免發(fā)生假陽(yáng)性反應(yīng)。
哺乳類動(dòng)物血漿中含一種酯酶,它對(duì)內(nèi)毒素有降解及脫毒的作用,故用LT法檢測(cè)血漿中的內(nèi)毒素易受此種物質(zhì)的影響,而造成假陰性結(jié)果。為了避免此等因素的影響,在試驗(yàn)前血漿需經(jīng)過(guò)特殊處理。目前共有下述四種方法處理血漿,即稀釋加熱法、酸化值液、氯仿浸取法及凝膠過(guò)濾法。我們及其它的一些工作者認(rèn)為稀釋加熱法簡(jiǎn)便易行,效果較好。
在鱟血液中,還有一種稱之為抗LPS因子(Anti - LPS - factor,ALF)的蛋白物質(zhì),分子量約為15KDa,為一種鱟血抗凝劑,對(duì)LPS介導(dǎo)的LT反應(yīng)有直接的抑制作用。ALF可抑制LPS對(duì)LT反應(yīng)的初始.階段。因此在制備鱟試劑時(shí),應(yīng)將此物質(zhì)清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ (o.o2M)可改善鱟試劑的質(zhì)量,提高敏感性約100倍。